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交叉配血-酶法与聚凝胺法.ppt

交叉配血-酶法与聚凝胺法

艾尔小茜茜
2018-05-06 0人钱柜777手机版登陆 0 0 0 暂无简介 举报

简介:本文档为《交叉配血-酶法与聚凝胺法ppt》,可适用于工程科技领域

交叉配血mdashmdash酶法与聚凝胺法byCherishKim酶介质交叉配血法原理RBC表面具丰富唾液酸造成红细胞表面带有大量负电荷在电场力的作用下红细胞在液体中相互排斥导致红细胞不能凝集。蛋白水解酶能消化和破坏这种唾液酸减少红细胞表面的负电荷导致红细胞表面的Zeta电势减小红细胞间的排斥力减弱细胞间的距离缩短IgG类红细胞血型抗体分子的两个抗原结合位点可以分别结合具有相应抗原的红细胞导致红细胞发生凝集反应。酶介质交叉配血试验可以检测出献血者或受血者血清中是否存在IgG类红细胞血型抗体确保受血者和献血者血液相容防止发生溶血性输血不良反应。实验仪器与试剂仪器:台式离心机℃恒温水浴箱显微镜试剂:菠萝酶溶液、生理盐水标本:mlABO同型全血标本人份木瓜蛋白酶菠萝蛋白酶实验步骤抽取受血者静脉血~ml待凝固后分离血清以生理盐水洗涤受血者红细胞次配成红细胞悬液将献血者血标本以同样方法分离血清生理盐水洗涤献血者红细胞次配成红细胞悬液取洁净试管支分别标记主侧管和次侧管。主侧管:受血者血清滴和献血者红细胞悬液滴次侧管:献血者血清滴和受血者红细胞滴两管分别加入菠萝酶溶液各滴实验步骤阳性对照管:RhD阳性O型红细胞悬液和人源性IgG类抗D血清各滴菠萝酶溶液滴阴性对照管:RhD阳性O型红细胞悬液和正常人AB型血清各滴菠萝酶溶液滴自身对照管:受血者自身血清和红细胞悬液各滴各试管经轻轻摇动后置℃水浴min取出试管轻轻摇动或经timesg离心min(或timesg离心s)取出试管轻轻摇动观察试验结果并记录试验结果受血者自身对照管内红细胞不凝集阳性对照管红细胞凝集阴性对照管红细胞不凝集主、次侧配血管内红细胞均不凝集表示受血者和献血者两血酶介质交叉配血相容献血者血液可输注如果受血者自身对照管内红细胞不凝集阳性对照管红细胞凝集阴性对照管红细胞不凝集主侧或(和)次侧管内红细胞凝集则表明两血不相容献血者血液不可输注。注意事项酶处理可增强一些抗原抗体系统的反应活性例如Rh和Kidd系统。酶处理后也会破坏一些抗原的结构例如M、N、Fya、Fyb抗原导致这些抗原抗体的反应性减弱。(可用抗球蛋白试验)应平行进行盐水介质交叉配血试验红细胞经蛋白酶修饰后可以改变红细胞悬液的物理性质在交叉配血试验中可以出现非特异性自身凝聚因此必须使用标准对照试验才能得出正确的试验结果方法学评价优点:操作简单、快捷曾广泛使用适用于急诊抢救患者的交叉配血缺点:可能使M、N、Fya、Fyb等抗原的抗体漏检存在输血安全隐患因此目前临床基本已经不再使用酶介质进行交叉配血试验低离子聚凝胺介质交叉配血试验原理:聚凝胺(polybrene)是一种高价阳性季胺盐多聚物溶解后可以产生较多的正电荷可以大量中和红细胞膜表面的负电荷减弱红细胞之间的排斥力使红细胞彼此间的距离缩短在离心力的作用下可以引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。由于降低介质的离子强度可以增加抗原抗体间的引力(或降低红细胞膜的Zeta点位)可以增强血型抗体凝集红细胞的能力。将红细胞和血清放置在低离子介质中孵育如果血清中存在不完全性红细胞血型抗体(IgG类)可以促进抗体和红细胞膜血型抗原结合加入聚凝胺促进红细胞凝集。离心后加入重悬浮液中和聚凝胺的凝集作用使正常红细胞的凝集解散而抗原抗体结合引起的红细胞凝集不会散开。实验仪器与试剂仪器:台式离心机、显微镜试剂:生理盐水低离子介质(LIM)聚凝胺试剂重悬浮液标本:mlABO同型全血标本人份实验步骤抽取受血者静脉血~ml待凝固后分离血清以生理盐水洗涤受血者红细胞次配成红细胞悬液将献血者血标本以同样方法分离血清以生理盐水洗涤献血者红细胞次配成红细胞悬液主侧管:加受血者血清滴献血者红细胞悬液滴次侧管:加献血者血清滴受血者红细胞悬液滴每管各加LIM溶液ml混匀室温孵育min每管各加滴聚凝胺溶液混合后静置stimesg离心s弃上清轻轻摇动试管目测细胞有无凝集如无凝集必须重做加入滴重悬浮液并轻轻混合肉眼观察结果取载破片一张用滴管分别从主侧管和次侧管内吸取红细胞悬液各滴均匀滴放在载玻片上用显微镜观察结果并记录实验结果将如果主侧管和次侧管内红细胞凝集散开则为聚凝胺引起的非特异性凝集表示受血者和献血者两血聚凝胺介质配血相容献血者血液可以输注如果主侧管或(和)次侧管内红细胞凝集不散开则表明抗原抗体结合的特异性反应两血不相容献血者血液不可输注(用户可使用IgG抗D抗体(效价ge)与RhD阳性红细胞反应做阳性对照实验测试本试剂的有效性。)注意事项聚凝胺介质交叉配血试验对Kell血型系统的抗体不能有效检出(阴性结果加做抗球蛋白试验)但汉族kk型几乎。临床输血进行交叉配血试验时应当首先进行盐水介质的交叉配血试验排除完全性(IgM类)红细胞抗体的存在后再进行聚凝胺介质交叉配血试验溶血标本不得用于交叉配血试验当重悬浮液加入后应尽快观察结果(不可超过min)以免反应减弱或消失聚凝胺溶液放置在玻璃瓶中过久可以导致红细胞凝集过弱因此必须保存在深色塑料瓶中聚凝胺是一种抗肝素试剂所以如果使用含肝素的血标本要加较多的聚凝胺来中和肝素方法学评价优点:安全、敏感、快速、操作简单结果易判定能为临床安全快速的输血提供有力保证。聚凝胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高能检出几乎所有规则抗体及不规则血型抗体适用于各类输血患者的配血缺点:漏检Kell系统(见注意事项)

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